Molecular Identification of the Antibiotic Producing Bacteria, Burkholderia Cepacia Complex, by Means of Real Time Pcr

Las técnicas moleculares, al ser rápidas y precisas, se han utilizado en la investigación taxonómica de muchos géneros bacterianos. La identificación de un grupo muy heterogéneo de especies, como el complejo Burkholderia cepacia (Bcc) y géneros afines, mediante técnicas básicas de microbiología, ha sido insuficiente. Sin embargo, en los últimos años, varios estudios han identificado el potencial biotecnológico de (Bcc). Por ello, la generación de técnicas como la PCR en tiempo real para su uso como herramienta de tipificación definitiva ha sido de suma importancia en la investigación. El objetivo principal de la presente investigación fue identificar molecularmente a las bacterias productoras de antibióticos (Bcc), a través del análisis de la región RecA mediante PCR en tiempo real. Para cumplir con el objetivo, se analizaron estadísticamente los métodos de extracción y purificación de ADN: High Pure Template Preparation Kit-ROCHE, hervido y PCI, mediante ANOVA y Tukey, determinando una diferencia significativa (p˂0,001); La metodología del kit ROCHE presentó los mejores resultados de calidad y concentración de ADN. El método de ebullición se muestra aquí, como una alternativa de bajo coste para mostrar un ADN con características y calidad aceptables para la técnica de PCR en tiempo real. Para la identificación molecular, se llevó a cabo la amplificación de las regiones 16S rRNA-Bcc, Burkholderia sp. (RecA) y B. cepacia-genomovar I (RecA) utilizando cebadores específicos. El análisis de las curvas de amplificación obtenidas por PCR en tiempo real confirmó que BC1 pertenece a la especie Burkholderia cepacia (genomovar I); posteriormente, se confirmó que BC2 pertenece al género Burkholderia, pero no se corroboró el genomovar del organismo; sin embargo, se afirma que la cepa pertenece a algún genomovar de Bcc basándose en la amplificación de la región 16S para Bcc y su identificación bioquímica.